1. 产品描述：

BCA低丰度蛋白定量检测法是基于BCA蛋白定量研制而成，其检测原理是碱性环境下蛋白质分子中的肽键结构能与Cu²⁺离子生成络合物，同时将Cu²⁺还原成Cu⁺，BCA 可敏感的特异的与Cu⁺结合，形成稳定的有色化合物，在562 nm处有高的吸光度，颜色的深浅与蛋白质浓度呈正比，可根据吸光度值的大小来测定蛋白质的含量。BCA低丰度蛋白定量试剂盒在1~100 μg/mL 浓度范围内有较好的线性关系。

2. 产品特点：

（1）检测范围1~100 µg/mL；

（2）变异系数小，定量效果佳；

（3）受去污剂、还原剂等杂质影响小。

1. 产品组分：

* 4 mg/mL 的 BSA 蛋白标准品，-25~-15℃冻存，12 个月有效。

2. 储运条件：

BCA低丰度蛋白定量试剂盒置于2~8℃保存，保质期12个月，2~8℃运输；

配套的BSA 蛋白标准品，置于-25~-15℃保存，保质期12个月，干冰运输。

3. 注意事项：

（1）37ºC 30 min 或 25ºC 室温反应 2 小时对测量较为便利，但严格来讲此时反应尚未达到终点，通常室温每 10 min OD₅₆₂ 值升高约 2 ~ 3%。然而，通常在 10 min 内可以测定 30 管以上，所以测量并不会明显影响测定精度。

（2）BCA 法检测样品中含有脂类物质时，光吸收值会偏高。样品中 EDTA 或葡萄糖浓度大于 10 mM 时，不能使用 BCA 方法。葡萄糖浓度大于 10 mM 时，可用改良 Lowry 法蛋白定量试剂盒。EDTA 大于 10 mM 的样品可用考染法蛋白质定量试剂盒。另外，蛋白质样品经液体样品蛋白抽提试剂沉淀后，可彻底去除干扰 BCA 法、考染法和 Lowry法蛋白测定的物质。

（3）每次测定应该重新测定并制作标准曲线。

（4）本产品仅限科研使用。

1. 蛋白定量标准曲线及实拍显色效果图：

图1 蛋白定量标准曲线

图2 蛋白标准曲线测定实拍效果图

以BSA标准品为检测样本，使用本品进行蛋白浓度测定。（图中数据仅供参考，实际的检测效果可能会略有不同）

2. 干扰物质附表：

1. 没有颜色？

原因分析：样品中含有铜离子络合剂。

解决方案：透析、脱盐或稀释样品；提高工作液中铜离子的浓度，如提高A:B至50:2；使用蛋白沉淀法去除干扰物。

2. 空白对照孔光吸收值正常，但是蛋白标准品和待测样品光吸收值低于预期？

原因分析：样品所用溶剂是强酸碱性缓冲液，改变了工作液的pH 值；光吸收波长选择错误。

解决方案：透析、脱盐或稀释样品；在562 nm读取吸光值。

3. 待测样品孔光吸收值高于预期？

原因分析：蛋白浓度过高；样品中含有脂类或脂蛋白。

解决方案：稀释样品；向样品中加入2% SDS以除去脂类干扰。

4. 所有孔，包括空白对照孔，呈暗紫色？

原因分析：缓冲液中含有硫醇、生物胺（儿茶酚胺）。

解决方案：透析或稀释样品；使用蛋白沉淀法去除干扰物。

5. 需要用不同的波长读取光吸收值？

原因分析：酶标仪或分光光度计没有562 nm滤光片。

解决方案：可以读取540 nm到590 nm区间的光吸收值，但是标准曲线的斜率和检测灵敏度都会受一定影响。