1. 产品描述：

信励致和^® BCA蛋白定量试剂盒是基于Bicinchoninic acid（BCA）法，该方法是近来广为应用的蛋白定量方法。其原理与Lowery法蛋白定量相似，即在碱性环境下蛋白质与Cu²⁺络合并将Cu²⁺还原成Cu⁺。BCA与Cu⁺结合形成稳定的紫蓝色复合物，在562 nm 处有高的光吸收值并与蛋白质浓度成正比，据此可测定蛋白质浓度。与Lowery法相比，BCA蛋白测定方法灵敏度高，操作简单，试剂及其形成的紫蓝色复合物稳定性俱佳，并且受干扰物质影响小。与考染法相比，BCA法的显著优点是不受去垢剂的影响。

2. 产品特点：

（1）检测范围 20~2000 µg/mL；

（2）变异系数小，定量效果佳；

（3）受去污剂、还原剂等杂质影响小。

1. 产品组分：

2. 储运条件：

BCA蛋白定量试剂盒置于2~8℃保存，保质期12个月，2~8℃运输；

配套的BSA蛋白标准品(5000 μg/mL)，置于-25~-15℃保存，保质期12个月，2~8℃运输。

3. 注意事项：

（1）本产品可以采用酶标仪（微孔检测法）或者分光光度计（试管检测法）测定蛋白浓度，如使用普通的分光光度计测定，需根据比色皿的最小检测体积，适当加大 BCA 工作液的用量使其不小于最小检测体积，样品和标准品的用量可相应按比例放大。使用分光光度计测定蛋白浓度时，每个试剂盒可以测定的样品数量可能会显著减少。

（2）试剂在低温条件或长期保存出现沉淀时，可搅拌或37℃温育使其溶解。

（3）BSA 标准品的稀释液需与待测样品的稀释液一致（可用双蒸水，1×PBS 或 0.9 %生理盐水进行稀释）。

（4）建议每次测定蛋白样品时，都绘制标准曲线。

（5）BCA 法检测样品中含有脂类物质时，光吸收值会偏高。样品中 EDTA 或葡萄糖浓度大于 10 mM 不能使用 BCA 方法，葡萄糖浓度大于 10 mM 时可用改良 Lowry法蛋白定量试剂盒，EDTA 大于 10 mM 的样品可用考染法蛋白质定量试剂盒。另外，蛋白质样品经液体样品蛋白抽提试剂沉淀后，可彻底去除干扰 BCA 法、考染法和 Lowry 法蛋白测定的物质。

（6）本产品仅限科研使用。

1.不同孵育时间下蛋白定量标准曲线及其实拍显色效果图：

以BSA标准品为检测样本，使用本品进行蛋白浓度测定。加入BCA工作液后，置于37℃分别孵育30、60、120 min，检测标准曲线如上图所示，孵育30 min与120 min的检测曲线相差较小，说明使用本品对蛋白进行定量时，仅需30 min即可达到优异的检测效果。 （图中数据仅供参考，实际的检测效果可能会略有不同）

2.干扰物质附表：

1. 没有颜色？

原因分析：样品中含有铜离子络合剂。

解决方案：透析、脱盐或稀释样品；提高工作液中铜离子的浓度，如提高A:B至50:2；使用蛋白沉淀法去除干扰物。

2. 空白对照孔光吸收值正常，但是蛋白标准品和待测样品光吸收值低于预期？

原因分析：样品所用溶剂是强酸碱性缓冲液，改变了工作液的pH 值；光吸收波长选择错误。

解决方案：透析、脱盐或稀释样品；在562 nm读取光吸收值。

3. 待测样品孔光吸收值高于预期？

原因分析：蛋白浓度过高；样品中含有脂类或脂蛋白。

解决方案：稀释样品；向样品中加入2% SDS以除去脂类干扰。

4. 所有孔，包括空白对照孔，呈暗紫色？

原因分析：缓冲液中含有还原剂、硫醇、含有生物胺（儿茶酚胺）等。

解决方案：透析或稀释样品；使用蛋白沉淀法去除干扰物。

5. 需要用不同的波长读取光吸收值？

原因分析：酶标仪或分光光度计没有562 nm滤光片。

解决方案：可以读取540 nm到590 nm区间的光吸收值，但是标准曲线的斜率和检测灵敏度都会受一定影响。