多糖多酚植物RNA提取难?看看这个!
发布时间:2024-08-21
实验室的小伙伴们都知道,RNA是植物分子生物学研究的重要对象之一,它不仅可以作为生物标志物,帮助辨别植物的健康状态和生长阶段,促进精准农业的发展。此外,植物中的RNA技术(如RNA干扰)还被应用于转基因技术,增强植物抗病、抗逆境的能力,从而提高作物产量和质量。而随着转录组学的发展,科学家们也可以从植物RNA中找到新药开发的线索。综上所述,研究植物样本中的RNA不仅对农业和生态系统的可持续发展有重要贡献,还推动了生物医药等领域的进步。可是如何从多糖多酚植物样本中提取到质量较好的RNA,却是许多实验人员头疼的事,这是为什么呢?
一、为什么提取多糖多酚植物样本中的RNA难?
首先我们来了解一下植物中的多糖多酚。
多糖是由多个单糖分子通过糖苷键连接而成的大分子,通常具有较高的分子量,它们在植物中发挥储能、结构支持和抗逆境的作用,常见的如淀粉、纤维素和果胶。
多酚是一类含有酚羟基的化合物,具有强大的抗氧化特性,起到保护植物免受紫外线、病害等环境压力的作用。多酚类物质包括黄酮、花青素和单宁。
常见的植物番茄、土豆、小麦和棉花等,都富含多糖或多酚。
常见富含多糖或多酚的植物
RNA提取困难主要是因为RNA不稳定,极易被RNase降解,RNase普遍存在且对RNA有高度特异性。并且,RNA常与蛋白质结合,导致分离过程复杂。而对于植物样本来说,由于其细胞壁的存在,可能导致样本研磨不充分进而加大RNA提取的难度;多糖多酚类植物样本的RNA提取更是难上加难,主要因为:
1. 多糖的结构和化学特性导致其与RNA相互作用,从而使得在洗脱过程中,部分RNA与多糖紧密集合而无法有效分离。此外,在RNA的沉淀过程中,多糖也可能与RNA形成凝胶状的沉淀物,这种凝胶结构会妨碍RNA的有效提取。
2. 多酚往往会与核酸和蛋白质一起沉淀,形成不溶性的化合物。这种沉淀物会干扰核酸的提取和纯化过程,导致目标核酸的得率显著降低。
3. 多糖多酚植物样本复杂,使得提取方法需要针对不同样本进行调整。
二、常见问题及解决方法
多糖多酚植物样本RNA提取过程中经常会遇到RNA提取得率低的问题。除多糖多酚对RNA提取的干扰外,还有以下两种干扰:
1. RNase污染:未使用DEPC水、无RNase的离心管和移液枪枪头都有可能导致样本中的RNA被外源性的RNase降解,从而影响最终RNA得率。
2. 样本处理不当:样本经过反复冻融,液氮研磨操作不当导致样本物理破碎不充分,导致RNA得率低。
解决方法:实验操作过程中,使用无RNase的试剂耗材,保证实验服和乳胶手套无菌无酶污染。对于样本处理,实验操作前可将样本保存在组织RNA样本保存液中。
三、信励致和®多糖多酚植物总RNA提取试剂盒助您轻松搞定多糖多酚植物提取
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信励致和®多糖多酚植物总RNA提取试剂盒可从植物组织,特别是富含多糖多酚或淀粉的植物组织(如棉花叶片,成熟水稻叶片,拟南芥种子,香蕉,枇杷叶片,马铃薯块茎,苹果,梨,西瓜果肉,猕猴桃,月季,烟草,百合等)中快速提取总 RNA,提取的总 RNA 纯度高,没有DNA、蛋白和其它杂质的污染。
便捷快速的RNA提取流程
另外,针对实验前样本保存问题,我们推荐信励致和®组织保存液(RNA提取用),无需液氮速冻,只要浸入 Tissue RNA Storage Reagent 中,即可在 37℃保存1天,室温保存1周,4℃保存4周或在-80 ~ -20℃长期保存,且反复冻融不会显著影响 RNA 完整性。
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