1. A260/A280 < 1.65?
原因分析:起始样品量过大;吸取了有机相或碎片;RNA沉淀乙醇洗涤不充分;RNA用水溶解或pH偏酸,低离子浓度和低pH条件下,A280值会较高。
解决方案:适当减小样品量;分相转移时,小心吸取水相;增加乙醇洗涤;可以选择用TE溶解。
2. RNA降解?
原因分析:提取的组织不新鲜;样本保存不当或反复冻融;RNase污染。
解决方案:采用新鲜组织,组织匀浆在冰上进行,避免RNA降解;样本置于-80℃保存,建议分装,避免反复冻融;确保实验器材和耗材无RNase污染。
3. 蛋白和多糖污染?
原因分析:起始样品量太大;吸取了有机相或碎片。
解决方案:适当减小样品量;分相转移时,小心吸取水相。