1. 产品描述：

信励致和^®逆转录合成第一链cDNA试剂盒(去基因组)使用的Reverse Transcriptase是在M-MLV(H-)Reverse Transcriptase 基础上突变得到的全新逆转录酶。具有更好的热稳定性，使其可用于具有二级结构或GC含量较高的RNA模板的逆转录，并且降低错配率，提高了克隆的保真度，适合少量模板以及低拷贝基因的逆转录。本产品以RNA为模板，在同一反应体系中，合成第一链cDNA的同时去除RNA中残留的gDNA。

2. 产品特点：

（1）本产品的逆转录酶经过性能优化，具有更高的热稳定性。

（2）操作简便，可有效降低操作过程中RNA的降解，提高实验效率。

（3）本产品可兼容多种类的模板。

1. 产品组分：

2. 储运条件：

-25~-15℃保存12个月，干冰运输，避免反复冻融。

3. 注意事项：

（1）操作过程应在冰上进行，操作过程应避免RNase污染，使用RNase-Free的枪头等耗材。

（2）建议逆转录得到的cDNA原液稀释5~10倍后再作为模板使用，若直接使用原液作为模板，建议cDNA原液体积不超过 qPCR反应体积的1/10。

（3）为保证反转录成功，建议使用高质量的RNA模板。

（4）RT Enzyme Mix 中含有高浓度甘油，溶液容易吸附在管壁和吸头外壁导致损失，用前请甩点离心，并避免吸头外壁沾附损失。

（5）产物可立即用于qPCR检测，或在-20℃保存，长期保存建议放置在-80℃。

（6）本产品仅供科研使用。

1. 逆转录产物质量检测：

以RNA为模板，分别使用本品与竞品进行逆转录反应，得到产物cDNA后使用自研产品2×热启动染料法qPCR预混液进行检测。实验结果如上图所示，使用本品所得的cDNA的qPCR扩增曲线优良，扩增效果与竞品几乎一致，说明本产品逆转录合成的cDNA质量较好。

2. 产品的实验重复性测试：

以RNA为模板，进行逆转录，得到的产物cDNA使用自研产品2×热启动染料法qPCR预混液进行检测，检测设置4个平行。实验结果如上图所示，4个平行的CT值几乎完全一致，说明本产品逆转录的重复性极好。

3. 产品冻融稳定性测试

以RNA为模板，进行逆转录，获得cDNA后，取部分样品进行50次反复冻融处理，部分样品不做处理设置为对照，使用自研产品2×热启动染料法qPCR预混液进行检测。检测结果如上图所示，产物经过50次反复冻融后与对照的CT值相似，说明使用本品获得的cDNA的稳定性极好。

无逆转录产物或目标产物含量低？

原因分析：出现上述问题大致原因有以下几点：起始RNA量不够；RNA被降解；RNA中包含逆转录抑制剂；多糖同RNA共沉淀；RNA存在二级结构或GC含量高；目的基因含量低。

解决方案：针对以上问题依次建议如下：增加RNA用量；重新提取RNA，使用DNase/RNase-free H₂O溶解RNA并保存在-80℃，避免反复冻融；通过乙醇沉淀去除抑制试剂；使用氯化锂沉淀RNA去除多糖；RNA使用前在65°C加热5 min，迅速置于冰上2 min，提高反应温度；延长反应时间或添加特异性引物。