信励致和^®线粒体膜电位检测试剂盒（JC-1）是一种以 JC-1为荧光探针，用于快速、灵敏地检测细胞、组织或纯化后的线粒体膜电位变化，是筛选早期凋亡细胞的常用方法。JC-1是一种广泛用于检测线粒体膜电位△Ψm 的理想荧光探针，其以电势依赖性的方式积聚在线粒体内。在线粒体膜电位较高时，JC-1以聚合物的形式聚集在线粒体基质中，发出红色荧光（Ex=585 nm, Em=590 nm）；在线粒体膜电位较低时，JC-1只能以单体的形式存在于胞浆中，产生绿色荧光（Ex=514 nm, Em=529 nm）。因此，通过分析红/绿荧光强度的比值可以检测线粒体膜电位的变化趋势。本试剂盒可用于荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察，也可以用荧光分光光度计检测或流式细胞仪分析。

本试剂盒内含CCCP，以作为诱导线粒体膜电位下降的阳性对照。对于六孔板中的样品，本试剂盒共可以检测100个样品；对于12孔板中的样品，本试剂盒共可以检测200个品。

（1）操作简便：无需额外配制其他试剂。

（2）特异性强：染色效果好、背景干净。

（3）细胞毒性低：无明显细胞毒性，染色后仍可继续培养。

1.产品组分：

-25 ~ -15℃避光保存12个月，尽量避免反复冻融。超纯水和JC-1染色缓冲液（5×）可置于2 ~ 8℃保存。冰袋运输。

（1）JC-1（200×）在4℃、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内，可以20 ~ 25℃水浴至全部融解并混匀后再使用。

（2）必须先将JC-1（200×）用试剂盒提供的超纯水充分溶解混匀后，再加入JC-1染色缓冲液（5×）。不可先配制JC-1染色缓冲液（1×）再加入JC-1（200×）。

（3）装载完JC-1后用JC-1染色缓冲液（1×）洗涤时，使JC-1染色缓冲液（1×）保持4℃左右，此时的洗涤效果较好。

（4）JC-1探针装载完并洗涤后尽量在30分钟内完成荧光检测。

（5）勿将JC-1染色缓冲液（5×）全部配制成JC-1染色缓冲液（1×），在本试剂盒的使用过程中，配制JC-1染色工作液以及后续洗涤均需直接使用JC-1染色缓冲液（5×）。

（6）如果发现JC-1染色缓冲液（5×）中有沉淀，必须全部溶解后才能使用，为促进溶解可以在37℃加热。

（7）CCCP为线粒体电子传递链抑制剂，对人体有害，操作时请小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。

（8）本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

（9）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

检测HEK293T细胞线粒体膜电位的荧光染色图：

图为使用本品检测HEK293T细胞线粒体膜电位的荧光染色图。在正常的HEK293T细胞线粒体中，JC-1大多以多聚体的形式聚集在线粒体基质中，发出红色荧光，而JC-1单体激发形成的绿色荧光相对微弱的；使用CCCP处理后，细胞内线粒体膜电位下降，JC-1无法维持多聚体形态，大多以单体的形式存在于胞浆中，绿色荧光显著增强。

原因分析：JC-1（200×）稀释前未完全融解；JC-1（200×）的稀释步骤错误；JC-1浓度过高。

解决方案：37℃解冻，待其完全融解后再吸取JC-1（200×）进行稀释；先将JC-1（200×）用试剂盒提供的超纯水充分溶解混匀后，再加入JC-1染色缓冲液（5×）；使用JC-1染色缓冲液（1×）适当增加稀释倍数。

原因分析：孵育时间过短；曝光时间过短。

解决方案：适当延长孵育时间；延长曝光时间。

原因分析：①JC-1 或 CCCP 浓度过高。②洗涤不充分。

解决方案：①降低 JC-1 或 CCCP 的浓度；调整曝光时间。②增加洗涤次数与时间。

原因分析：处理细胞的 CCCP 浓度和时间不够。

解决方案：提高 CCCP 浓度或延长 CCCP 孵育时间。