1. 产品描述：

信励致和^®去内毒素质粒小提中量试剂盒对传统的碱裂解法进行了优化，并采用先进的硅胶膜吸附技术，在短时间内高效、特异的吸附质粒 DNA，且最大限度地除去蛋白质、多糖和其它非核酸类物质。以下操作步骤适用于提取5 ~ 15 mL过夜培养的大肠杆菌，质粒提取得率和质量与宿主菌的种类、培养条件、质粒拷贝数、质粒稳定性、抗生素等因素有关。本试剂盒采用特制的内毒素去除试剂，得到的质粒DNA 纯度高，内毒素含量极低，适用于酶切、PCR、连接、测序、转染等一系列常规生物学实验。

2. 产品特点：

耗时短，质粒得率高，质粒纯度高，内毒素极低。

1. 产品组分：

2. 储运条件：

室温（15~30℃）条件下可保存12个月，加入RNase A和指示剂的重悬液P1应置于2~8℃保存，可稳定保存6个月。常温（15~30℃）运输。

3. 注意事项：

（1）重悬液 P1 在使用前需加入 RNase A 和指示剂溶液（将试剂盒内提供的 RNase A 和指示剂溶液全部加入，可以适当润洗，加入后打√），混匀，置于 2 ~ 8 ℃保存。

（2） 首次使用前请按漂洗液 PW 瓶身标签所示，加入48mL 无水乙醇，混匀，加入后打√，室温保存。

（3）使用前请先检查各组分尤其是裂解液 P2 是否出现析出浑浊，如有浑浊，可 37 ℃条件下温浴至溶液澄清，混匀后再使用。

（4）注意不要直接接触裂解液 P2、中和液 P3 和去内毒素液 P4，使用时应戴手套，使用后应立即盖紧盖子。

（5） 提取的质粒得率和质量与宿主菌的种类、质粒拷贝数、稳定性等因素有关。

（6）指示剂的使用方法：本试剂盒添加指示剂用于指示整个操作的正确性，对人体无害。使用时将试剂盒内配备的指示剂全部加入重悬液 P1 中进行混匀，混匀后的重悬液 P1 为澄清的红色（长时间放置会变淡）。将重悬液 P1 加入到收集好的菌体中混匀，混匀后的溶液为浑浊的浅红色或浅黄色；添加裂解液 P2 彻底混匀后，溶液变为澄清的红色，则说明充分裂解；再添加中和液P3 混匀后，溶液为澄清的黄色，说明充分中和复性。

（7）操作过程中需要自备数个干净无内毒素的 2 mL离心管，无水乙醇，异丙醇。

（8）各步骤的离心力和时间为参考，可结合自身离心机条件调整合适的离心力或转速、时间。

1. 质粒提取效果检测：

使用本品与竞品分别提取不同拷贝数的质粒，相同洗脱体积下，本品所得的质粒浓度更高，且内毒素含量较于竞品低1~2个数量级。

2. 转染效果检测：

原因分析：菌液量不够；菌液浓度不够；宿主菌老化；质粒拷贝低；宿主菌不合适；漂洗液未加乙醇；裂解不充分；洗脱不充分。

解决方案：增加菌液用量；延长摇菌时间；缩短摇菌时间，选择活性更高的宿主菌；更换为高拷贝质粒；选择合适的宿主菌；按照要求添加乙醇；按照说明书要求逐步操作或减少菌体用量；将洗脱液加热至 55 ℃或确保洗脱液滴加到吸附柱膜中央或延长洗脱放置时间。

2.质粒纯度低？

原因分析：RNA 残留；基因组 DNA 残留；盐离子残留。